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本试剂盒采用台盼蓝染色法，用于细胞活力检测，试剂盒中各组分均以无菌形式提供，可直接用于细胞实验。


台盼蓝(Trypan Blue)，一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞(活细胞呈透明无色)和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝(合适浓度)还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。

组分	100T	500T
细胞重悬液	100mL	250mL×2
2×台盼蓝染液	10mL	50mL

保存：室温，有效期2年。


按照单次使用量0.1mL，两个规格的试剂盒分别可供检测100次和500次。

• 细胞计数前需对细胞进行充分的清洗，因为细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，残留血清蛋白会导致较暗的染色背景。
  
• 台盼蓝对人体有害，请注意小心防护。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 对于悬浮细胞，离心收集细胞，对其充分清洗后，加入适量细胞重悬液重悬细胞制成单细胞悬液；对于贴壁细胞，先用胰酶消化细胞，再按照悬浮细胞的方法制备单细胞悬液。
  
• 取0.1mL单细胞悬液，按照1:1比例与0.1mL 0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3～10min。
  
• 取少量上述染色细胞加入血细胞计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞(即损伤细胞和死细胞)和总细胞。
  注：
  ① 用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其完全覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。
  ② 1mm²方格内细胞数通常控制在20～50 cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。
  
• 按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，
  
  • 计算每mL细胞数目：Cells/mL=1mm2大方格内的平均细胞数×稀释倍数×10⁴；
    注：此时的稀释倍数为：步骤2所取的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数
    
  • 总细胞数目：Total cells= (Cells/mL)×最初制备单细胞悬液的总体积
    
  • 细胞活力值：Viability (%) = (总细胞数-总着色细胞数)/总细胞数×100
    注：通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。

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